Quantification of human polyomaviruses MCPyV and HPyV6 in malignant and non-malignant skin lesions

Abstract Background: Human Polyomaviruses such as MCPyV and HPyV6 are frequently found as part of healthy skin microbiota and have been associated with Merkel cell carcinoma (MCC), pruritic and dyskeratotic dermatoses, respectively. Their presence in other types of skin conditions varies greatly depending on lesion type and population. Objectives: To analyse comparatively the presence of MCPyV and HPyV6 in nonmelanoma skin cancers and healthy skin. Methods: The authors utilized qPCR techniques to quantify these pathogens in NMSC, premalignant diseases, and healthy skin of 87 patients. Results: MCPyV was detected in over 40% of samples, while HPyV6 was in 9.6%. MCPyV load was higher in squamous cell carcinomas (SCC) compared to basal cell carcinomas (BCC) (p = 0.016) and HPyV6 showed a higher percentage of infected cells in areas of low solar exposure as well as normal skin (p = 0.012). A fair agreement (kappa = 0.301) was found between MCPyV detection in lesions and their respective perilesional skin, indicating a random process of local dissemination of the virus. Study limitations: The lack of a larger sampling of different lesion types and protein expression analyses limits the correlation findings. Conclusions: This is the first report of HPyV6 detection in the healthy skin of a Brazilian population, but the role of both polyomaviruses in NMSC has yet to be demonstrated.

Cerebrospinal fluid challenges for the diagnosis of herpes simplex infection in the central nervous system / Desafios do exame do líquido cefalorraquidiano para o diagnóstico de infecção por herpes simplex no sistema nervoso central

Abstract Herpes simplex virus (HSV) is a cause of a severe disease of the central nervous system (CNS) in humans. The demonstration of specific antibodies in the cerebrospinal fluid (CSF) may contribute to the retrospective neurological diagnosis. However, the commercial immunological tests for HSV infection are for use in serum samples. Objective: The aim of the present study was to adapt a commercial kit anti-HSV IgG used for serum samples to be performed with a CSF sample. Methods: Forty CSF specimens from 38 patients with suspected CNS HSV infection were serially diluted for detecting anti-HSV IgG by enzyme immunoassay (EIA). The same samples were also analyzed with the polymerase chain reaction (PCR). Results: The sensitivity of EIA test for HSV was 5% (dilution 1:40) and 65% (dilution 1:2) in CSF, and HSV DNA PCR was 15%. The combined analysis of EIA (dilution 1:2) and PCR increased the sensitivity up to 72.5%. The inflammatory CSF was associated with positive HSV PCR. Conclusions: We demonstrated the importance to adapt serological anti-HSV IgG EIA test for CSF assays to increase the accuracy of the analysis, considering the low concentration of specific antibodies in CSF.

Resumo O vírus herpes simples (HSV) é um dos agentes causadores de uma doença grave no sistema nervoso central (SNC) em humanos. A detecção de anticorpos específicos no líquido cefalorraquidiano (LCR) pode contribuir para o diagnóstico neurológico retrospectivo. Entretanto, os testes imunológicos comerciais são para uso em amostras de soro. Objetivo: Adaptar um kit comercial sorológico anti-HSV IgG para ser utilizado no de LCR. Metodos: Quarenta amostras de LCR de 38 pacientes com suspeita de infecção por HSV no SNC foram diluídas pesquisa de anticorpos anti-HSV IgG pelo método imunoenzimático (EIA). Além disso, as mesmas amostras também foram analisadas por reação em cadeia da polimerase (PCR). Resultados: A sensibilidade do teste EIA para o HSV consistiu em 5% (diluição 1:40) e 65% (diluição 1:2) no LCR, e o PCR do DNA do HSV, 15%. A análise combinada de EIA (diluição 1:2) e PCR aumentou a sensibilidade para 72,5%. Houve associação entre presença do LCR inflamatório e PCR positiva para HSV. Conclusões: Demonstramos a importância na adaptação previa do teste sorológico anti-HSV IgG EIA para ensaios do no LCR, a fim de aumentar a acuracia da análise, considerando a baixa concentração de anticorpos específicos no LCR.

An immunofluorescence test for diagnosis of ophthalmic herpes in a mouse corneal model

Herpes simplex virus type 1 (HSV-1) ophthalmic disease is the most common cause of corneal blindness in humans world-wide. Current culture techniques for HSV take several days and commercially available HSV laboratory based diagnostic techniques vary in sensitivity. Our study was conducted to evaluate the use of a quicker and simpler method to herpes ophthalmic diagnosis. Corneal smears were made by firm imprints of infected mouse eyes to glass slides, after smears were fixated with cold acetone, and an indirect immunofluorescence (IIF) method was performed using monoclonal antibodies in a murine model of ophthalmic herpes. Eye swabs from infected mice were inoculated in Vero cells for virus isolation. Cytology and histology of the eye were also performed, using hematoxylin-eosin routine. Mouse eyes were examined by slit-lamp biomicroscopy for evidence of herpetic disease at various times postinoculation. We made a comparative evaluation of sensitivity, specificity and speed of methods for laboratory detection of HSV. Our results indicate that this IIF method is quick, sensitive, specific and can be useful in the diagnosis of ophthalmic herpes as demonstrated in an animal model.

A doença oftálmica do vírus herpes simplex do tipo 1 (HSV-1) é a causa mais comum de cegueira córnea em humanos mundialmente. Técnicas de cultura atuais para HSV levam vários dias e laboratórios de HSV comercialmente disponíveis estabelecem que as técnicas diagnósticas variam em sensibilidade. Nosso estudo foi conduzido para avaliar a aplicação prática de um método mais rápido e simples para diagnosticar o herpes oftálmico. Decalques córneos foram feitos por impressões firmes de olhos de camundongos a lâminas de vidro, depois os decalques foram fixados com acetona fria, e um método de imunofluorescência indireta (IIF) foi executado empregando anticorpos monoclonais no modelo murino de herpes oftálmico. Swabs de córnea foram inoculados em células Vero para o isolamento de vírus a partir de camundongos infectados. A citologia e a histologia do olho foi feita pela rotina de hematoxilina e eosina. Os olhos de camundongos foram examinados através de oftalmomicroscopia para evidência de doença herpética em vários tempos pós-inoculação. A avaliação comparativa da sensibilidade, especificidade e velocidade de métodos para detecção laboratorial de HSV foi feita. Nossos resultados indicam que este método de IIF é rápido, sensível, específico e pode ser útil no diagnóstico de herpes oftálmico como demonstrado no modelo animal.

A non-randomized comparative study using different doses of acyclovir to prevent herpes simplex reactivation in patients submitted to autologous stem cell transplantation

The reactivation of Herpes Simplex virus (HSV) occurs in 70 percent to 80 percent of patients submitted to autologous stem cell transplantation (ASCT); it increases the severity of chemotherapy-induced mucositis. Therefore, the use of acyclovir in ASCT patients is considered standard practice. However, the minimum dose needed to prevent reactivation is a matter of debate. We compared two doses of acyclovir in a non-randomized fashion in 59 patients submitted to ASCT: 32 patients received a dose of 125 mg/m² IV every six hours and the subsequent 27 patients received a dose of 60 mg/m² IV every six hours. Viral excretion was evaluated through weekly viral culture of oral swabs. Grade 4 mucositis was more frequent in Group 1 (p= 0.03). The reactivation rates in Groups 1 and 2 were 9 percent and 4 percent, respectively (p= 0.62, 95 percent confidence interval -7 - 18). Prophylaxis with reduced doses of intravenous acyclovir seems to be as effective as a higher dose in inhibiting HSV reactivation, with a significant reduction in cost. Prospective randomized studies are needed to confirm our conclusions.

Diagnóstico laboratorial da infeccão pelo vírus herpes simples (HSV) em pacientes transplantados e não-transplantados / Laboratorial diagnosis of herpes simplex virus infection (HSV) in transplanted and non-transplanted patients

INTRODUÇAO: O vírus herpes simples (HSV) é dividido em dois sorotipos (HSV-1 e HSV-2) responsáveis, respectivamente, pelos herpes labial e genital. Embora a infeccão pelo HSV tenha um curso rápido, esse agente está freqüentemente relacionado a complicacões no tratamento de pacientes imunocomprometidos, como indivíduos transplantados, na condicão de agente oportunista. OBJETIVOS: Comparar e avaliar o uso de três técnicas atuais para diagnóstico de HSV em pacientes transplantados e não-transplantados. MATERIAL E MÉTODOS: Oitenta e quatro amostras clínicas consecutivas provenientes de 47 indivíduos transplantados e 37 não-transplantados foram coletadas de junho de 2001 a julho de 2002, sendo, simultaneamente, submetidas a nested multiplex reacão em cadeia da polimerase (PCR) (nmPCR), multiplex PCR (mPCR) e isolamento viral (IV) em células vero. RESULTADOS: Das amostras, 33,3 por cento (28/84) foram positivas para o HSV por IV, 34,5 por cento(29/84) por mPCR e 42,8 por cento (36/84) por nmPCR. Pela técnica de imunofluorescência direta (IFD), 85,7 por cento (24/28) das amostras foram caracterizadas como HSV-1, 86,2 por cento (25/29) pelo mPCR e 88,9 por cento(32/36) pelo nmPCR. Foram caracterizadas como HSV-2 pelas três técnicas empregadas 4,8 por cento(4/84) das amostras. Não houve diferenca significante de deteccão entre as técnicas de diagnóstico do HSV (p = 0,38), embora o nmPCR tenha detectado mais amostras de pacientes transplantados (p = 0,05). CONCLUSAO: Apesar do desempenho similar entre as técnicas, o nmPCR se mostrou ferramenta útil para pacientes transplantados ou para aqueles sob tratamento antiviral, onde é esperada baixa carga viral em suas amostras.

Herpes simples virus ophthalmic disease induced using two different methods of mice inoculation

Two different procedures for inoculation of HSV on corneas of balb/c mice were evaluated. The first was by the use of HSV suspensions directly on the corneas and the other was after corneal scarification. Animals by this later method presented greater morbidity and mortalitythan those of first group, suggesting than inoculation of HSV without scarification of the cornea should be the method of choice for the study of HSV ophthalmic infection. This model showed also be an efficient experimental system to testing antiviral drugs.

Exposiçäo à infecçäo pelo vírus da hepatite B em trabalhadores da coleta de lixo domiciliar e hospitalar no Município do Rio de Janeiro / Hepatitis B morbidity among municipal and hospital waste collection workers from Rio de Janeiro city, Brazil

Investiga a morbidade de hepatite B entre trabalhadores da coleta de resíduos domiciliares e hospitalares.A tendência de estabelecer sistemas diferenciados de coleta e tratamento para os resíduos hospitalares tem elevado os custos dos serviços e é questionada por diversos autores. As amostras de sangue foram coletadas de 155 trabalhadores da coleta domiciliar e 31 trabalhadores da coleta de resíduos hospitalares, empregados da Companhia Municipal de Limpeza Urbana do Rio de Janeiro. A prevalência de HBV foi de 14,2 por cento e 12,9 por cento para trabalhadores da coleta domiciliar e hospitalar. Não houve diferença com significância estatística entre os dois grupos estudados sendo isto, um indicador da inexistência de diferenças entre os dois tipos de resíduos com referência à exposição à infecção por HBV